很多患者，对于UVA为什么最多只需要照射30分钟不够理解，看了下面这篇文章，相信你会有更清楚的认识。
长波紫外线照射对培养的正常人黑素细胞增殖及黑素合成的影响
中华皮肤科杂志 1999年第6期第32卷 论著
作者：项蕾红 郑志忠 祝绿川 廖康煌
单位：200040上海医科大学附属华山医院皮肤科
【摘要】目的 了解uva对黑素细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用体外细胞培养技术、mtt法及naoh法研究不同剂量uva照射对黑素细胞增殖和黑素合成的作用。结果随着照射时间的增加，黑素细胞的增殖率增加，黑素合成量也增加。结论照射剂量在3.6j/cm2以内时，黑素细胞增殖率逐步上升，以后趋向稳定。在测定的照射剂量内，黑素合成量与照射剂量呈正相关。
紫外线照射可引起皮肤的色素改变。为了进一步探讨长波紫外线(uva)对黑素细胞的作用机理，我们研究了uva照射对体外培养的黑素细胞增殖和黑素合成的影响，现报道如下。
材料和方法
一、材料
1.正常人黑素细胞的培养：取包皮环切术标本，去除皮下组织后分割成1cm×2cm的小片，0.25％胰蛋白酶4℃消化过夜。将消化后的表皮接种于mcdb153培养液中，其成分为10％小牛血清,霍乱毒素0.2μg/ml、ibmx10－4mol/l、氢化可的松0.5μg/ml、胰岛素5μg/ml、青霉素100u/ml、链霉素0.1mg/ml、二性霉素0.5μg/ml、12－0－十四烷酰法佛醋酸酯－13(tpa)8nmol/l。吹打成单细胞悬液，离心后计数。按4～6×106/ml的密度接种于直径为35mm培养皿中，2～3周后传代，接种于96孔板上继续培养以备用。
2.光源：长波紫外线治疗仪，波长320～400nm，波峰345nm,功率2mw/cm2。
3.其他：911型酶标仪（上海第三分析仪器厂），96孔培养板、培养皿（美国,corning）,四甲基偶氮唑蓝mtt（上海华美生物工程公司），胰蛋白酶（difco,进口分装），mcdb153培养液（美国,gibco），霍乱毒素和法佛酯等添加成分（美国，sigma)。
二、方法
1.多巴染色：将传代细胞接种于盖玻片上，贴壁后，予10％甲醛固定1h，入0.1％3,4－二羟基苯丙氨酸孵育溶液，37℃孵育45min，再入新鲜的孵育溶液，37℃孵育2～3h冲洗、染色并脱水。可在光镜下见棕黑色，证实为黑素细胞。
2.黑素细胞增殖的测定：将传代细胞的浓度调节至2×104/ml,加入96孔培养板，每孔0.1ml。每列分别用uva照射10、20、30、60、120、180min，共6组并设置培养液及未经长波紫外线照射的细胞作为对照，每组均设8个孔。置37℃，5％co2饱和湿度条件下培养56～72h。于结束前4h弃原液，加入mtt(1mg/ml)溶液，每孔100μl，4h后弃上清液，加入0.04nhcl异丙醇100μl/孔，摇床上振荡10～15min，至甲结晶完全溶解，置酶标仪测a值，波长492nm。按下列公式计算促增殖率：促增殖率=(uva照射a值－未经uva照射a值－培养液a值)/(未经照射a值－培养液a值)．100％。
3.黑素合成的测定：培养的人黑素细胞每天uva照射5、15、25和30min，连续照射4d。用naoh法测定经uva累积照射20、60、100和120min的黑素细胞合成黑素的量。将经处理的黑素细胞去上清液，d-hank冲洗2遍，0.25％胰蛋白酶消化6～8min，计数后离心，重新悬浮于1nnaoh100μl，37℃孵育1h，加入400μl蒸馏水稀释，在405nm测定a值，同时制备合成黑素的标准曲线。促增殖率计算同黑素细胞促增殖率。
4.实验结果应用方差分析进行统计学检验。
结果
1.体外培养的黑素细胞分成6组，每组8孔，分别经uva照射10、20、30、60、120和180min，相应剂量为1.2、2.4、3.6、7.2、14.4和28.8j/cm2，发现各处理组与未经uva照射的对照组相比，其增殖率分别为7.2％、15.9％、28.6％、23.0％、24.7％和27.3％。经方差分析，f=3.8，p＜0.01,各组均数间的差异有非常显著性。各组两两间比较，结果示黑素细胞经uva照射10min和20min时，黑素细胞数量与对照组相比差异无显著性；照射30min组、60min组、120min组和180min组分别与对照组相比，差异有显著性。
2.将体外培养人黑素细胞分成4组，每组5孔，经uva每天照射5、15、25和30min，连续照射4d，即累积剂量为2.4、7.2、12.0和14.4j/cm2，黑素细胞黑素含量分别为76.84、84.21、94.74和115.79fg/细胞。与对照组(76.84fg/细胞)相比，照射剂量为2.4j/cm2时，黑素细胞合成黑素的量无增加，随照射剂量加大，黑素细胞合成黑素的功能明显活跃，黑素含量逐步增加，当照射剂量为7.2、12.0和14.4j/cm2时，黑素含量增加率为9.60％、23.30％和50.69％。经方差分析，f=8.33，p＜0.05,各组均数间的差异有显著性。
讨论
我们用mtt比色法[1]检测了照射不同剂量uva对黑素细胞增殖的作用。结果显示，uva照射30min内，即照射剂量在3.6j/cm2时，促黑素细胞增殖率逐步上升。以后，随着时间的进一步延长，促增殖率变化不大，其相互间差异无显著性，但与未经照射组相比，差异均有显著性。同时用naoh法［2］测定了黑素细胞合成黑素的量，随照射剂量的增加，黑素细胞合成黑素的能力被进一步激活，黑素含量逐步增加。当照射剂量达到14.4j/cm2时，与对照组相比，差异有显著性。
libow等［3］认为uva照射是体外培养正常人黑素细胞的促分裂剂，紫外线照射后使黑素细胞数目增加，可能是由于紫外线促进了黑素细胞的有丝分裂。ramirez?bosca［4］观察了不同剂量uv对体外培养黑素细胞的影响。当照射剂量达200mj/cm2时，细胞树突数量增多，酪氨酸酶活性及细胞黑素总量均明显增加；但随照射剂量增大，细胞增殖呈下降趋势，直至停止。
从本实验中，我们可以推得下述结论：①uva照射可以促使黑素细胞的增殖和诱导黑素合成。②uva照射的促增殖作用主要在30min以内，即照射剂量在3.6j/cm2以内。当照射剂量从3.6j/cm2增加到21.6j/cm2,促黑素细胞增殖率无明显增加。因而，uva的促黑素细胞增殖作用是有限的。③uva照射可诱导黑素细胞合成黑素能力加强，黑素含量与照射时间呈正比。
文章选自：中华皮肤科杂志 1999年第6期第32卷 论著
